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高效液相色譜柱性能影響因素有很多，例如，硅膠純度、色譜柱尺寸、顆粒形狀、粒徑、表面積、孔徑，化學(xué)性質(zhì)包括鍵合類型、碳覆蓋率、封端，在選擇高效液相色譜柱之前，先多了解自己的樣品和雜質(zhì)，他們的類型結(jié)構(gòu)、極性、酸堿性、分子量大小等等。1.樣品是極性的且弱酸性的;就可以選擇C18在100%酸性水溶液條件下檢測，即要選擇承受100%純水且對極性化合物保留很好的色譜柱。2.如果樣品極性太強(qiáng)，或酸性太強(qiáng);可以選擇CN，NH2，或硅膠柱，HILIC(親水色譜)，也有使用C18+強(qiáng)陰離子對試劑...

高效液相色譜柱的鍵合基質(zhì)分為硅膠基質(zhì)、聚合物基質(zhì)等，其中硅膠基質(zhì)應(yīng)用較為廣泛，其特點(diǎn)主要包括以下3方面：(1)低pH值，硅膠鍵合鍵容易水解(pH8)。(2)在接近中性的條件時(shí)，硅醇基裸露，顯酸性，不適宜分離堿性化合物。(3)某些硅膠被一定金屬污染，這些金屬會(huì)引起峰的不對稱或拖尾，甚至化合物的死吸附。高效液相色譜柱的硅膠基質(zhì)可分為全多孔硅膠微粒、雜化硅膠顆粒和實(shí)心核硅膠顆粒。1、全多孔硅膠基質(zhì)：全多孔硅膠，以其全多孔的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有很高的比表面積，故具有很高的柱效。其機(jī)械強(qiáng)度大的...

反相色譜是迄今在高效液相色譜中應(yīng)用*泛的技術(shù)，主要是因?yàn)樗m用于分析絕大多數(shù)的非極性物質(zhì)和很多的可離子化的及離子化合物。如果污染是因?yàn)橹貜?fù)進(jìn)樣時(shí)強(qiáng)保留物質(zhì)的累積引起的，利用簡單的清洗步驟來除去這些污染物往往就能恢復(fù)其色譜性能。經(jīng)過等度運(yùn)行后的高效液相色譜柱，有時(shí)用90～100%含量的溶劑B(雙溶劑反相系統(tǒng)中洗脫能力較強(qiáng)的溶劑，如甲醇、乙晴、四氫呋喃等)沖洗20個(gè)柱體積可以清除污染物(色譜柱的柱體積和空柱管體積概念不同，一根4.6x250mm柱子的柱體積只有2.5ml，2.1x...

液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分，其化學(xué)性質(zhì)參數(shù)包括以下幾個(gè)方面：1、硅膠基質(zhì)硅膠基質(zhì)是通用的基質(zhì)，強(qiáng)度大，化學(xué)修飾容易，但使用的pH值范圍有限(一般為2—8，特殊修飾的可以達(dá)到1—12)。2、聚合物基質(zhì)聚合物基質(zhì)多為聚苯乙烯—二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂，化學(xué)穩(wěn)定，應(yīng)用pH范圍寬，具有更強(qiáng)的疏水性，對蛋白質(zhì)等樣品分離效果較好;但強(qiáng)度較小，有機(jī)溶劑可能導(dǎo)致聚合物溶脹而受損，批次重復(fù)性較差，商品化色譜柱不多，一般價(jià)格較貴。3、載碳量載碳量是基質(zhì)表面鍵合相的比例，載碳量高，則...

離子色譜柱是一種用來改善在反相色譜中保留較差的強(qiáng)極性物質(zhì)保留行為的色譜技術(shù)。它通過采用強(qiáng)極性固定性，并且結(jié)合高比例有機(jī)相/低比例水相組成的流動(dòng)相來實(shí)現(xiàn)這一目的。而這樣的流動(dòng)相組成尤其有利于提高電噴霧離子化質(zhì)譜的靈敏度。離子色譜柱的分離機(jī)制：分離機(jī)理在目前還存在著爭議，主要包括以下三個(gè)方面：(1)分配機(jī)理(2)離子交換(3)偶極-偶極相互作用。更多的試驗(yàn)現(xiàn)象則表明HILIC色譜柱的保留機(jī)理包含氫鍵作用、偶極作用和靜電作用等多種次級(jí)效應(yīng)，很難將其區(qū)分開來。影響離子色譜柱保留的主要...

色譜柱在使用前，最好進(jìn)行柱的性能測試，并將結(jié)果保存起來，作為今后評(píng)價(jià)柱性能變化的參考。在做柱性能測試時(shí)要按照色譜柱出廠報(bào)告中的條件進(jìn)行，只有這樣，測得的結(jié)果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同。樣品的前處理過程：(1)最好使用流動(dòng)相溶解樣品。(2)使用預(yù)處理柱除去樣品中的強(qiáng)極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。(3)使用0.45μm或0.22μm的過濾膜過濾除去微粒雜質(zhì)。實(shí)際使用中，液相色譜柱有可能會(huì)失效，常見的原因有：1、色譜柱...

使用高效液相色譜柱做HPLC分析時(shí)，通常會(huì)遇到色譜柱柱壓過高等情況，色譜柱柱壓過高原因何在?怎么解決呢?高效液相色譜柱柱壓高原因與解決方法：色譜柱柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因：1、拆去保護(hù)柱，看柱壓是否還高，否則是保護(hù)柱的問題，若柱壓仍高，再檢查2、把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查3、將柱子的進(jìn)出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱...